产品货号：
RFT366
中文名称：
单链RNA Ladder(15～50nt)
英文名称：
RNA Marker(15-50nt)
产品规格：
25T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品由5种不同长度的单链RNA分子混合而成，保存在TE缓冲液中，每条带浓度约为100ng/μl（配成即用型RNA Ladder后，每条带的浓度约为50ng/μl）。使用前与等体积2×RNA上样缓冲液混合即可上样电泳。该RNA Ladder适用于跑尿素变性胶，电泳后可以使用核酸染料如RealGood红色核酸染料(货号：RFT232)或RealGood All核酸染色剂(货号：RFT270)均可以染色得到清晰的条带分离效果。
RNA Ladder(15～50nt)的5歌条带的大小为15、20、25、30、40、50nt。
20% T3.3C TBE-Urea PAGE
电泳条件：1×TBE恒压200V 16～8mA 75min
染色：RealGood Red后染30min
16～40nt RNA上样量1μg，RFT366上样量5μL
| 组分 | 规格 |
| RNA Ladder(15～50nt） | 60μL |
| 2×RNA上样缓冲液(尿素变性胶，RNase-free) | 1mL |
保存：-20℃，有效期2年。
以每次上样5μL计算，混合好的单链RNA Ladder可以使用大约25次。
- 单链RNA Ladder产品适用于变性PAGE垂直电泳，不适用于水平琼脂糖凝胶电泳。
- 建议单链RNA Ladder现用现配，因为混合有上样缓冲液的单链RNA稳定性不好。
- ssRNA实验样品序列和实验样品上样量的不同，显示的片段大小与RNA Ladder可能会有微弱的差别。
以下使用方法均以8×10cm凝胶厚1.0mm示例，其他规格凝胶请适当调整。
一、凝胶制备
- 可以选择尿素PAGE RNA电泳试剂盒(货号：RFT332)或按照以下程序制胶。
- 分离胶配制：根据表格一，将不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解。
表一：TBE-尿素PAGE分离胶配方表(总体积5mL，适用于厚度1.0mm小板胶)RNA长度 最佳凝胶浓度 尿素(克) 40% PAA(29:1) 10×TBE RNase-free水 10%APS TEMED 200～1000nt 5% 2.1克 0.625mL 0.5mL 至体积5mL 50μL 5μL 50～400nt 8% 2.1克 1mL 30～300nt 10% 2.1克 1.25mL 40～200nt 12% 2.1克 1.5mL 10～150nt 15% 2.1克 1.875mL 6～100nt 20% 2.1克 2.5mL - 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，使凝胶表面保持平整。
- 静置10～20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
- 去除覆盖在分离胶上的水层；按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混合；最后加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
表二：TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表(总体积2mL，适用于1.0mm厚度胶)尿素 40% PAA(29:1) 10×TBE RNase-free水 10%APS TEMED 0.84克 0.2mL 0.2mL 补至体积2mL 20μL 2μL - 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端；将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
- 常温静置30～60分钟，等待浓缩胶聚合。
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二、样品制备
取适量体积单链RNA Ladder样品与等体积的2×RNA上样缓冲液(尿素变性胶，RNase-free)混合，70℃处理5分钟，冰浴制冷后待上样。待测样品也需要进行同样处理。
三、电泳
- 预电泳(可选)：电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200V预电泳30分钟。电泳结束后，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2～3次，去除残余的尿素。
- 上样：根据梳齿确定RNA Ladder上样量，一般是10齿1mm厚梳子RNA Ladder上样5μL，15齿1mm厚梳子上样3μL。
- 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 适用条件 200V 15～20mA/板胶 10～15mA/板胶 60+min 最佳电压，最优的分辨率 - 等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳，取出凝胶进行后续实验。
变性胶浓度 溴酚蓝 二甲苯菁 5% 35nt 130nt 8% 19nt 75nt 10% 15nt 55nt 15% 10nt 52nt 20% 5nt 35nt
四、染色
单链RNA推荐用RealGood Red红色核酸染料(货号：RFT232)或RealGood All核酸染色剂(货号：RFT270)染色，两种染料均可以得到清晰的条带分离效果。
- 其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
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